姓名:趙葉鋒 班級：食品科學113 學號：20xx013522

大三的第二學期塊結束了，這個學期操作了四個微生物實驗，以及一個自主設計性實驗。通過前階段對四個實驗的操作和認知的基礎上，展開第五個實驗的自主設計。實驗分別是菌落總數測定，霉菌和酵母的檢查和計數，乳酸菌的檢驗，微生物藥敏試驗以及探討環境因素對微生物生長的影響。

這學期的微生物實驗是在上學期微生物實驗的基礎上的累積和擴展延伸：以培養基的制備與滅菌，玻璃器皿的洗滌、包扎和滅菌，微生物接種技術和細菌的革蘭氏染色為技術基礎進行的，以加強學生基礎理論知識和基本技能的培養為目的。

下面我來談談我在實驗中的心得體會。

第一個實驗是菌落總數測定。讓我重新認識了一下這個名詞：菌落形成單位，我現在的理解就是：1ml或者1g待測樣品中菌落的個數，一定要注意的是單位是CFU/ml或CFU/g。還有就是要掌握好對高壓蒸汽滅菌鍋的操作。實驗之前要充分做好預習工作，以便實驗的進行。由于是測定微生物實驗，就要尤其小心其他雜菌的混入影響實驗結果。因此要做好實驗儀器和各種試劑的滅菌，有培養皿，試管，移液槍頭（裝在盒子中），按要求配置好的瓊脂培養基和生理鹽水，按各自要求用紗布和報紙包扎好，送入高壓蒸汽滅菌鍋進行滅菌。玻璃儀器在包扎前要進行清洗，并烘干，以免水分沾濕報紙。滅完菌后取出物品進入超凈工作臺，超近工作臺的紫外燈在進入20分鐘前開啟，并在進入時關閉，以免影響人體。要對臺面進行消毒處理，用酒精擦拭�？梢栽诘却�瓊脂培養基冷卻到50攝氏度左右前對待測樣品進行10倍系列稀釋至需要的濃度。要注意的是一定要標記好濃度或者按順序排列在試管架上以免弄混，同一個試管里吸取樣品才能用同一個槍頭進行移液。再進行平板接種。待瓊脂培養基冷卻好后，用右手打開紗布并將錐形瓶拿住，將瓶口靠近酒精燈再進行滅菌，左手拿培養皿用大拇指和食指稍微打開培養皿蓋，將瓊脂培養基倒入培養皿中心內，不用倒很多，使瓊脂培養基沒過培養皿表面即可。培養皿一定是平拿在手上的，倒好后輕輕蓋上培養皿蓋，緩慢地平方在超凈工作臺臺面邊緣處，再推至中間。再用移液槍取1ml樣品快速打入培養皿中央，蓋上培養皿蓋，然后用手輕輕搖晃，千外不要太大力。然后貼上標簽記號，靜置。如此依次操作下去。靜置一段時間待培養基凝固后倒置放入恒溫培養箱培養一段時間再取出進行觀察計數。

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葡萄球菌：G+，球形，呈葡萄串狀排列

鏈球菌：

G+，球形，呈鏈狀排列

肺炎雙球菌：G+，球形，呈雙排列

/典型性肺炎

奈瑟菌：G-

，細胞內/外/內外，球形，呈雙排列

G-

桿菌：G-，不規則排列

弧菌：G-，弧形，不規則排列

破傷風桿菌：G+，細長桿菌，芽胞正圓形，位于菌體頂端，比菌體大

產氣莢膜梭菌：①G+,粗大桿菌，芽胞橢圓形，位于次極端，不比菌體大 無意義

②G+，粗大桿菌，可見透明莢膜

肉毒梭菌：G+，粗大桿菌，芽胞橢圓形，位于次極端，比菌體大

炭疽桿菌：①G+，粗大桿菌，芽胞橢圓形，位于中央，比菌體小 無意義

②G+，粗大桿菌，呈竹節狀排列，有透明莢膜

分支桿菌：紅色，抗酸染色，桿狀，單/多個排列

/腹膜炎

棒狀桿菌：G+(革蘭染色)/藍色（美蘭染色），棒狀，呈柵欄狀排列，可見異染顆粒

癬菌：可見藍色大分生孢子，有隔

假絲酵母菌：G+

（革蘭染色）/藍色（棉蘭染色），圓形菌體，可見芽生孢子，假菌絲

新隱：墨汁染色，可見負染的圓形菌體，有寬厚莢膜

梅毒螺旋體：鍍銀染色，褐色，菌體螺旋細密規則，兩端尖直

鉤端螺旋體：鍍銀染色，褐色，菌體螺旋極其細密規則，兩端成鉤狀

內基小體：HE染色，胞漿中可見嗜酸性圓形均質團塊

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滅菌：

1．熱力滅菌法

干熱滅菌法：160-170℃，2h

高壓蒸汽滅菌法：103.4kPa (121℃)，15-30min 2．紫外線滅菌：265-266nm，破壞DNA構型

培養基：

1.液體培養基——基礎培養、生化反應、糖發酵管 2.固體培養基（斜面培養基）——純培養、短期保存菌株 3.半固體培養基——檢測細菌動力

化膿性球菌的分離鑒定：

致病性腸道桿菌的分離鑒定：

平板劃線法

接種工具：接種環

培養基——化膿菌：血平板，腸道菌：SS平板

注意事項：菌量適當；遵守無菌操作原則，全程避免雜菌污染；劃線力度、劃線角度

觀察細菌的形態特征

1.單染色法：觀察細菌形態，但不能鑒別 2.復染色法（觀察形態，鑒別細菌） 革蘭染色法、抗酸染色法

3.特殊染色法——特殊結構或特殊成分的染色 常見應用：莢膜、芽胞、鞭毛、異染顆粒染色

革蘭染色法：

1.涂片

標記載玻片→滴加標本→用接種環涂布均勻，形成直徑約1cm菌膜

2.干燥：空氣中，或酒精燈火焰上方熱空氣中 3.固定：迅速通過酒精燈外焰三次，冷卻 4.染色

初染：滴加結晶紫，覆蓋菌膜，靜臵1min，流水沖洗(背面) 媒染：滴加盧戈碘液，覆蓋菌膜，靜臵1min，流水沖洗

脫色：玻片浸入95%乙醇中，沖洗至染料不再溶下為止，水洗(背面)

復染：滴加石炭酸稀釋復紅，覆蓋菌膜，靜臵30s，流水沖洗(背面)

5.干燥(濾紙吸干水分)、鏡檢(油浸鏡)

甘露醇發酵實驗 培養基：甘露醇發酵管 接種工具：接種針 方法 1滅菌接種針 2從斜面沾取菌落 3接種至培養基液面下 4滅菌接種針 5培養18-24h 結果判定 陽性：藍→黃 致病性葡萄球菌

血漿凝固酶實驗

玻片凝集試驗 方法

1玻片劃分兩格 2滅菌接種環

3分別取鹽水或兔血漿于兩 4取待檢菌，鹽水中研磨 5滅菌接種環

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葡萄球菌：G+，球形，呈葡萄串狀排列

鏈球菌：G，球形，呈鏈狀排列

肺炎雙球菌：G+，球形，呈雙排列

/典型性肺炎

奈瑟菌：G-，細胞內/外/內外，球形，呈雙排列

G桿菌：G，不規則排列

弧菌：G，弧形，不規則排列

破傷風桿菌：G，細長桿菌，芽胞正圓形，位于菌體頂端，比菌體大

產氣莢膜梭菌：①G,粗大桿菌，芽胞橢圓形，位于次極端，不比菌體大

無意義

②G+，粗大桿菌，可見透明莢膜

肉毒梭菌：G+，粗大桿菌，芽胞橢圓形，位于次極端，比菌體大

炭疽桿菌：①G+，粗大桿菌，芽胞橢圓形，位于中央，比菌體小 無意義

②G+，粗大桿菌，呈竹節狀排列，有透明莢膜

分支桿菌：紅色，抗酸染色，桿狀，單/多個排列

/腹膜炎

棒狀桿菌：G+藍色（美蘭染色），棒狀，呈柵欄狀排列，可見異染顆粒

癬菌：可見藍色大分生孢子，有隔

假絲酵母菌：G+（革蘭染色）/藍色（棉蘭染色），圓形菌體，可見芽生孢子，假菌絲

新隱：墨汁染色，可見負染的圓形菌體，有寬厚莢膜

梅毒螺旋體：鍍銀染色，褐色，菌體螺旋細密規則，兩端尖直

鉤端螺旋體：鍍銀染色，褐色，菌體螺旋極其細密規則，兩端成鉤狀

內基小體：HE染色，胞漿中可見嗜酸性圓形均質團塊

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微生物在地球上存在了30多億年，人類在數百萬年前出現之后就一直和微生物發生著千絲萬縷的聯系。發面、果酒和啤酒釀造、牛奶和奶制品的發酵等都是那些看不見的小生命做出的貢獻。微生物存在于我們生活中的每一個角落，通過微生物實驗我們可以更加的了解微生物的“習性”就如同養的寵物一樣，什么樣的食物會發育更好，什么樣的天氣會心情好，什么樣的玩具會有益等等。培養、分離、鑒別微生物或積累代謝產物。自然界中培養基的種類很多，但是不同的培養基中，一般含有水分、碳源、氮源、無機鹽和生長因子等，不同類別的微生物對PH值的要求一般不同。同過這些實驗便能一一考證。

實驗是培養學生的動手能力、觀察能力、思維能力、表達能力、合作能力、創新能力等的最佳途徑。還要求實驗技術人員必須具備相應的素質，實驗操作人員必須 具備較扎實的專業基礎、熟練的實驗技能及高度的責任心，在工作中要善于總結，同時還要和理論課老師積極溝通，這樣才能夠真正的學好微生物實驗這門課程。在每一次實驗中不僅僅要專心認真的做實驗，還要認真的寫實驗報告，并從實驗中總結不足。再比如在調試顯微鏡的時候由低倍向高倍慢慢調試，在使用高倍時更應該小心調試細準焦螺旋，以免壓壞載玻片，在使用油鏡后要將油鏡拭擦干凈，保證顯微鏡的清潔，這些細節是需要注意的。

以下就我們做的實驗錯誤做列舉：

進行菌種接種的時候，選擇合適的方式并，注意不要把平板弄破，等到平板凝固后才可以進行接種。接種時也要注意在無菌條件下接種。經過培養后，再觀察最后得出結論。在酸奶中菌落測定時，封口不及時有外界的細菌污染。藥敏實驗中因為試驗中放置牛津杯時也將培養基戳破，導致實驗觀察受到影響，并且在接種時因為亂放培養基將未接種和已接種的培養基混淆導致試驗中3個培養基并沒有實驗結果，實驗失敗。

我們的自主設計實驗是探究滲透壓對微生物生長的影響，原理是將細菌置于抵滲液中，菌體因吸收水分膨脹甚至破裂；如果將菌體置于高滲液中，則菌體內的水分就會滲出，結果發生質壁分離現象。不同的細菌對滲透壓的抵抗力不同。但無論哪種細菌對滲透壓的抵抗力是有一定限度的，超過一定限度則使菌體生長受到抑制只有在等滲溶液中，微生物才能正常生長、繁殖。實現這一理論我們需要制作200ml的牛肉膏蛋白胨培養基（牛肉膏1g，蛋白胨2g，蒸餾水200nl），將其調PH至7.2,后平均分成四份各50ml，分別加入0g、1g、2.5g、5g的NaCl固體，配置成NaCl濃度分別為0%、2%、5%、10%的4種不同濃度的牛肉膏蛋白胨培養基.從培養基中吸取10ml加入試管中，不同濃度的培養基各取三支試管。在此操作時因實驗思考不嚴謹是采取分別稱量配置了3份不同濃度的溶液，而正確的做法應該是配一份未加入NaCl的培養基，再份為3份，加入不同克數的NaCl，這樣一來可以避免由于營養素的計量不同導致的誤差。雖后來的實驗結果并未受到影響，但思考不嚴謹是值得反思的。

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食品衛生綜合檢驗試驗總結

食品質量091 金秀建 20xx016521

為期五天（20xx年x月x日-15日）的食品衛生綜合檢測實驗已經告一段落了，在這一周的微生物實驗主要包括牛奶中大腸菌群的計數、雞蛋中沙門氏菌的檢驗和牛奶中金黃色葡萄球菌的檢驗三個實驗，經過三個綜合實驗的課程，能讓我更能理解試驗時要掌握的細節，也要保持頭腦的時刻清醒。同時讓我對這三種微生物有了更進一步的認識，同時讓我也對實驗也更加熟悉了。

首先我們做的是大腸菌群的計數，它是采用MPN（最大可能數法）的計數來測定的。大腸菌群的特性為：在37℃，24小時內能發酵乳糖，產酸、產氣，好氧或兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽孢桿菌，一般認為該菌群細菌可包括大腸埃希氏菌、檸檬酸桿菌、產氣克雷白氏菌和陰溝腸桿菌等。其檢測原理為細菌在樣品內的分布是隨機的，所以檢測細菌時，可按概率理論計算菌數。大腸菌群MPN計數的檢驗程序為樣品的稀釋、初發酵試驗、復發酵試驗和最后的大腸菌群最可能數(MPN)的報告。那么在第一天的上午，老師基本給我們講了實驗的原理和步驟，以及一些需要注意的地方，我們便開始計算自己需要配制的實驗試劑的量，并且稱取試劑的量和清洗所要用的實驗器皿，首先配置的是生理鹽水和LST肉湯，并且把生理鹽水和LST肉湯分裝到試管內，蓋好蓋子包扎好進行滅菌，滅完菌也就到了吃飯時間，等下午來接種培養了。

牛奶樣品與生理鹽水以1:9的比例進行混合，搖勻后做10倍系列的稀釋，做了3個稀釋度。隨后將三個稀釋度的樣品勻液以每個稀釋度3支試管接種到內裝小導管的含LST肉湯的試管中，最后放入恒溫培養箱中培養24h。在經過24h的培養后，所有的試管內均產生氣體，而后我們要將培養后的有菌落的LST肉湯接種到BGLB肉湯試管中進行培養24-48h，觀察后發現所有的BGLB管都產氣，顏色也有原來的綠色變成暗黃色，證明也產生了酸，所以記為所有產氣管為大腸菌群陽性管。最后查MPN表可得出每毫升樣品中大腸菌群的MPN為大于等于1100ml/MPN。

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微生物實驗心得體會

這學期的微生物實驗已經結束，這是我第一次接觸到微生物的世界中，以前也只是在書本中學習，但是真正走進它們的世界中是通過這個課程開始的。在開始微生物實驗之前我是以為這個實驗不會很難，但是通過本學期的學習發現這個課程真的很難。你不僅需要理論知識作為鋪墊，你還需要有嚴謹的實驗精神。

第一節課老師給我們介紹了我們本學期微生物實驗的幾個實驗和報告的要求，也讓我們了解了微生物實驗和以往其他實驗的不同。實驗步驟雖然很簡單，但是往往一個微小的細節處理不當也會導致你整個實驗結果的失敗。這個我真的深有體會，我們小組的實驗結果都很不理想。實驗步驟說難也不難，其實無非是先對配置培養液，然后對清洗干凈的試管、培養皿以及配置好的培養液進行滅菌，等滅菌完了就放入無菌室進行細菌的接種，最后將接種好細菌和培養液的培養皿放進恒溫培養箱進行培養�？此坪芎唵蔚牟僮鬟^程我卻狀況百出。我總結了幾點導致這么多次實驗失敗的地方。第一是操作不夠規范，在培養皿中倒入培養液后沒有搖勻導致培養基邊緣開裂，未等瓊脂培養液凝固就倒置導致培養基分布不均勻。第二是理論知識欠缺，沒有等培養液冷卻至40到50攝氏度就倒入培養基然后馬上就接種了細菌，導致細菌已經被燙死。

好在值得欣慰的是最后一個自主實驗還是比較成功的。試驗以環境對微生物生長的影響為題設計實驗，我們小組通過PH值，溫度，紫外線照射三個方面進行研究，結果很滿意，很明顯。大腸桿菌在PH值為7時生長最適，在溫度為37℃時生長最佳，紫外線會抑制其生長。

不得不承認，通過這次實驗的學習，我們學到了很多，得到了很多，有些是書本上學不到的，只有自己參與了，操作了，才會知道。也要感謝老師對我們的照顧。

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